TNF-α对老年COPD患者调节性T细胞CTLA-4表达的影响

摘要：目的 研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)上的细胞毒T细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4)在老年COPD急性加重期患者中的表达水平及变化,以及在COPD中,TNF-α对CTLA 4表达的影响.方法 收集成年组(47～64岁)、老年组(65～88岁)COPD急性加重期患者及正常对照组的外周血,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测TNF-α在外周血血清中的含量;用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),抗体孵育后用流式细胞术检测Treg中CTLA-4的比例,RT-qPCR检测外周血单个核细胞中TNF-α mRNA的相对表达量.收集成年COPD患者外周血,以免疫磁珠法分选Treg,加入重组人TNF-α与Treg共培养,Western blot及RT-qPCR检测CTLA 4及其mRNA的表达水平.结果 ELISA检测显示:成年COPD组[0.96 (0.54～1.38)]外周血Treg中的CTLA-4的表达比例较成年对照组[0.01(0.00～0.03)]明显升高(P ＜0.05),而老年COPD组[0.03 (0.01～0.04)]较老年对照组[0.06 (0.04～0.09)]下降(P ＜0.05),老年对照组高于成年对照组(P＜0.05),老年COPD组却低于成年COPD组(P＜0.05).RT-qPCR检测显示与成年对照组(0.97±0.66)比较,TNF-α在外周血单个核细胞中mRNA的相对表达量在成年COPD组(5.88±1.52)升高(P＜0.05),老年COPD组(12.78±3.50)较老年对照组(3.77±2.72)升高(P＜0.05),而老年对照组高于成年对照组(P＜0.05),老年COPD组高于成年COPD组(P＜0.05);ELISA检测显示与成年对照组(61.38±22.61)比较,TNF-α在外周血血清中的浓度在成年COPD组(183.78±58.99)升高(P＜0.05),老年COPD组(280.00±67.64)较老年对照组(123.31±36.13)升高(P＜0.05),而老年对照组高于成年对照组(P＜0.05),老年COPD组高于成年COPD组(P＜0.05).相关关系:在正常对照组中,年龄与外周血血清中TNFα的浓度呈正相关(r=0.673,P＜0.05),而排除年龄因素,成年组FEV1％pred与外周血血清中TNF-α的浓度呈负相关(r=-0.848,P＜0.05),老年组FEV1％ pred与外周血血清中TNF-α的浓度呈负相关(r=0.791,P＜0.05).在COPD患者中,外周血Treg中CTLA 4的比例与外周血血清中TNF-α的浓度呈负相关(r=-0.904,P＜0.05).RT-qPCR检测显示与处理前(1.19±0.25)及对照组(1.02±0.02)比较,Treg中CTLA-4 mRNA的相对表达量在TNF-α处理120 min组(0.34±0.10)下降(P＜0.05),对照组与处理前比较差异无统计学意义(P≥0.05);Westernblot检测显示与处理前(0.50±0.06)及对照组(0.49±0.10)比较,Treg中CTLA-4的含量在TNDα处理120 min组(0.21±0.02)下降(P＜0.05),对照组与处理前比较差异无统计学意义(P≥0.05).结论 COPD急性加重期患者外周血血清中TNF-α的浓度及外周血Treg上CTLA-4的比例升高;重组人TNF-α可能使COPD患者体内CTLA-4的表达减少;炎症机制及细胞免疫机制之间能相互影响,并影响到COPD的发生发展.